兔子單克隆抗體制備

更新時間：2021-11-04

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單克隆抗體制備限于技術保護的原因，目前，兔單克隆雜交瘤細胞制備技術被一家公司壟斷，所以我們無法通過像類似制備小鼠單克隆抗體那樣，制備兔源雜交瘤細胞獲得兔源單克隆抗體。為此，公司在一大批免疫學與基因工程學專家的幫助下，先后建立了兩套兔源單克隆抗體制備方案。這兩種方案均不依賴于兔源骨髓瘤細胞，但是其抗體的種源特性毫無疑問是兔源，在保留兔源單克隆抗體優勢的同時，大大壓縮試驗周期，提高試驗成功率。

方案一噬菌體展示技術

M13單鏈絲狀噬菌體展示系統是目前應用廣泛的文庫展示系統，通過將蛋白、抗體或多肽與噬菌體pIII蛋白融合表達，使之參與噬菌體組裝，并展示在噬菌體表面，形成噬菌體展示文庫。使用噬菌體展示文庫，針對特定靶分子進行3-5 輪親和篩選，可以富集能特異性結合靶分子的噬菌體，得到相應的DNA序列信息。

艾柏森（北京）生物科技有限公司目前開發的噬菌體展示技術服務平臺涵蓋了免疫抗體庫、天然抗體庫等常用的文庫類型，可根據客戶的特殊需求定制個性化文庫，并提供靈活高效的篩選服務。在此技術儲備的基礎上，我們提供的兔源單克隆抗體噬菌體展示方案，可高效靈活的根據客戶需要大規模探測高親和力抗體，同時結合公司*的兔源Fc表達質粒，與高效真核表達系統，使得我們的抗體擁有*的表達效率。

方案二重組抗體制備技術

艾柏森（北京）生物科技開發出一種革命性的單克隆抗體生產技術，使單克隆抗體的生產不sha害動物，不依賴雜交瘤。該技術通過分離培養B細胞，并利用ELISA、Western Blot、IHC（Immunohistochemistry）等方法篩選出抗原特異性B細胞。再通過分子克隆的手段重組表達完整的抗體分子。該技術可用于開發高品質的兔子和小鼠等不同物種的單克隆抗體。

其主要依托技術有：

高效的B細胞體外培養體系

高通量B細胞篩選技術

穩定的VH和VL抗體分子表達體系

高通量的抗體分子測序平臺

兔子單克隆抗體制備服務項目

服務項目 (Service Items)		周期（周） Time(weeks)	方案一：噬菌體展示技術（Phage Display）					方案二：異源表達重組技術 (Heterogeneous Recombination)
			多肽 Peptide	小分子 Molecular	磷酸基/甲基/乙基化多肽 Phosphate/Methyl/ acetyl-specific			目前只有針對部分腫瘤相關通路熱點分子的抗原，詳情請與公司技術人員溝通
多肽設計與合成 Peptide design & synthesis	多肽設計 Peptide design	~2	可選，免費
	多肽合成 Peptide synthesis		√			√
	小分子或多肽偶聯 conjugation		√	√		√
免疫階段 Immunization	免疫2只兔子 Immunized 2 rabbits	~8	√	√		√	√
	ELISA檢測 Elisa detection		√	√		√	√
cDNA制備 cDNA preparation	逆轉錄制備cDNA文庫 prepare cDNA library by RT-PCR	~1	√	√		√	√
	cDNA 文庫質檢 cDNA library QC check		√	√		√	√
構建Fab抗體庫 Fab library construction	VH與VL基因獲得 obtained VH and VL genes	10~15	√	√		√	√
	構建初級抗體庫 primary antibody library construction		√	√		√	√
	構建Fab抗體庫 Fab library construction		√	√		√	√
噬菌體篩選 phage screening	噬菌體顆粒包裝 phage particles package	10~15	√	√		√
	磁珠親和篩選 magnetic beads affinity screening		√	√		√
	陽性克隆回收基因測序 Recover positive clones and DNA sequencing		√	√		√
抗體表達 Antibody expression	特異性雙鏈基因合成與Fc基因橋接 synthetic of target phage gene and Fc gene	~5	√	√		√	√
	構建真核表達載體 Eukaryotic system expression plasmids construction		√	√		√	√
	真核表達 Eukaryotic system expression		√	√		√
	穩轉細胞系構建 Stably transfected cell line construction						√
純化與檢測 Purification and detection	標簽純化 Tag affinity purification	~1	√	√		√	√
	特異性親和純化 Antigen specific affinity purification		√	√		√	√
總周期（月） Total lead time(months)			7~9				3~5

注：

單克隆抗體制備價格面議；

請慎重考慮周期事宜，以上時間僅為理想條件下短周期；

為了縮短試驗周期建議考慮自行提供抗原直接免疫做起；

免疫環節設立驗收節點，效價合格，取脾臟，效價不合格，終止實驗；

抗體庫構建步驟啟動之前，至少支付此步驟的50%全款；完成項目，支付尾款。

單克隆抗體制備服務組合:

客戶：提供抗原蛋白信息
制備流程：
1）抗原制備質粒表達蛋白純化多肽設計合成及交聯；
2）免疫：*免疫兔子2只，失敗后又加免3只；
3）ELISA/Western-blot試驗監控兔子血清中的抗體效價和特異性，根據ELISA和WB檢測，篩選兔子；
4）cDNA文庫制備與噬菌體載體構建；
5）磁珠鏈霉素親和篩選；
6）陽性克隆測序與基因合成橋接；
7）真核表達質粒構建；
8）穩轉細胞構建； 9）試表達鑒定與結果交付；
交付產品（每種抗原，所有兔子總共的）
1）1株針對免疫原特異性的單克隆雜交瘤細胞株
2）1ml（濃度約0.1~1mg/ml）純化的抗體，Elisa效價應至少1:200以上；
制備時間：3~6個月
兔子單克隆抗體制備成功案例：
Publication: Plos One	IF：3.05
Title：TSC1/2 signaling complex is essential for peripheral na?ve CD8+ T cell survival and homeostasis in mice.	Name：anti- Tuberin antibody
Species: Mouse	Type：Rabbit Recombination Monoclonal antibody

兔子單克隆抗體制備.1.jpg

兔子單克隆抗體制備.2.png

Immunohistochemical analysis ofparaffin-embedded mouse placenta tissue using anti-Tuberin antibody. Counterstained with hematoxylin.

Recommended constration: 1:200

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