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抗體制備對血清的采集與保存說明

更新時間:2020-08-18點擊次數(shù):1526
   抗體是機體在抗原刺激下所產(chǎn)生的特異性免疫應(yīng)答的重要產(chǎn)物,也是免疫學(xué)實驗中的常用試劑,對于抗原的分析鑒定和定量檢測極為重要,在各種免疫學(xué)實驗室診斷中廣泛應(yīng)用。抗體制備技術(shù)發(fā)展經(jīng)歷了三個階段:用純化抗原免疫動物獲得血清的多克隆抗體為一代抗體;用B細胞雜交瘤技術(shù)制備的單克隆抗體為第二代抗體;利用基因工程技術(shù)制備的基因工程抗體為第三代抗體。有了質(zhì)量好的抗原,還必須選擇適當(dāng)?shù)拿庖咄緩剑拍墚a(chǎn)生質(zhì)量好(特異性強和效價高)的抗體。
  我們以家兔為例,家兔是常用以產(chǎn)生抗體的動物,因此主要討論兔血的收集。羊等較大動物以頸靜脈、動脈取血,鼠等小動物取血可參閱有關(guān)資料。取兔血有兩種方法:一是耳緣靜脈或耳動脈放血,一是頸動脈進血,也可心臟采血。取動脈或靜脈放血時,將兔放進一個特造的木匣或籠內(nèi),耳露于箱(籠)外,也可由另一人捉住兔身。剪往耳緣的毛,用少許二甲苯涂抹耳廓,30s后,耳血管擴張、充血。用手輕拉耳尖,以單面剃須刀或尖的手術(shù)刀片,快速切開動脈或靜脈,血液即流出,每次可收集30-40ml。然后用棉球壓迫止血,凝血后洗往二甲苯。二星期后,可在另一耳放血。此法可反復(fù)多次放血。頸動脈放血時,將兔仰臥,固定于兔臺,剪往頸部的毛,切開皮膚,暴露頸動脈,插管放血。放血過程中要嚴(yán)格按無菌要求進行。
  收集的血液置于室溫下1h左右,凝固后,置4℃下,過夜(切勿冰凍)析出血清,離心4000rpm,10min。在無菌條件,吸出血清,分裝(0.05-0.2ml),貯于-40℃以下冰箱,或凍干后貯存于4℃冰箱保存。
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